如何計算胜肽濃度？完整說明與實例解析

在生物實驗中，準確計算胜肽（Peptide）濃度是非常關鍵的一環。然而，由於合成與純化過程中存在多種變數，單純以凍乾後的胜肽粉末重量來計算濃度往往不準確。本文將說明計算胜肽濃度的關鍵概念，包括胜肽純度、胜肽含量，並說明如何透過**光吸收法（A280）**來準確推估濃度。

胜肽純度（Peptide Purity）與胜肽含量（Peptide Content）

這兩者是計算胜肽濃度時必須區分的兩個概念：

胜肽純度（Purity）

• 指的是樣品中具有正確目標序列的胜肽比例。

• 通常以高效能液相層析（HPLC）分析來判定。

• 不包含錯誤序列或未完全合成的胜肽。

胜肽含量（Content）

• 指的是凍乾粉末中「真正的胜肽重量」相對於總重量（含水分、鹽分、溶劑等非胜肽成分）的百分比。

• 例如：1 mg 凍乾粉末若胜肽含量為 80%，代表其中僅有 0.8 mg 是目標胜肽。

若你要製備 1 mg/ml 的胜肽溶液，且勝肽含量為 80%，那麼應該使用 0.8 ml 溶劑來溶解 1 mg 凍乾粉末，而不是 1 ml。

常見計算方法：使用光吸收值（A280）

若胜肽序列中包含**色胺酸（W）或酪胺酸（Y）**等具有吸光能力的氨基酸，可透過 280 nm 波長的吸光值來推算濃度。

吸收係數（Extinction Coefficient）：

• Tryptophan（W）：5560 AU/mmole/ml

• Tyrosine（Y）：1200 AU/mmole/ml

若胜肽中同時含有多個這些色胺酸或酪胺酸，則總吸收係數為各自乘上個數後加總。

計算公式

使用以下公式計算胜肽濃度：

• A280：在 280 nm 波長下的吸光值（使用 1 cm 光徑比色皿）

• DF：稀釋倍數（dilution factor）

• MW：胜肽分子量（mg/mmole）

• ε：摩爾吸收係數（根據序列中 W 與 Y 的數量計算）

計算實例：

假設胜肽序列為：

測得 50 倍稀釋的溶液在 280 nm 的吸光值為 0.5 AU，則：

表示原始胜肽溶液的濃度為約 10.7 mg/ml。

無 W 或 Y 如何測定？

若胜肽序列中不含色胺酸或酪胺酸，則無法用 A280 方法。這時必須使用：

• 氨基酸分析（Amino Acid Analysis）：準確測定氨基酸組成與總量。

• 或使用重量計算結合胜肽含量來估算濃度，但誤差會較大。

注意事項與建議

• 光吸收法假設胜肽為未摺疊狀態，色胺酸與酪胺酸暴露於水中。

• 若勝肽易形成二級或三級結構，或溶解性不佳，建議使用變性劑（如 6 M 胍鹽酸、8 M 尿素）來準確測定。

• 記得移除變性劑後，才可用於生物功能測試。

計算胜肽濃度並不如想像中單純，單靠重量往往會低估或高估實際濃度。建議結合胜肽含量資訊與適當的分析方法（如 UV 吸收或氨基酸分析）來取得準確數據。這對於實驗設計與數據解讀都具有決定性的影響。

胜肽濃度計算機